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猪弓型虫抗体检测试剂盒(间接ELISA)

产品编号:100715

检测方法:Elisa试验

检测样品:血清

规格:96T/192T


  

猪弓型虫抗体检测试剂盒(间接ELISA)




先容

猪弓形虫(Toxoplasma gondii, TO )抗体检测试剂盒用于检测猪血清中的弓形虫抗体。

本试剂盒采用间接ELISA法,在酶标板条微孔上预包被纯化的TO抗原。在试验中,加入稀释后的待检血清,经过温育后,若样品中含有TO特异性抗体,则与包被板上的抗原结合,经洗涤除去未结合的抗体和其他成分后;再加入酶标二抗,与检测板上的抗原抗体复合物发生特异性结合;再经洗涤除去未结合的酶结合物;在微孔中加入TMB底物液,经酶催化形成蓝色产物,加入终止液终止反应后,用酶标仪450nm波长测定反应孔中的吸光度A值。

组份

1

抗原预包被板条

1/2

7

阴性对照

0.8/1.6ml

2

酶结合物

6/11ml

8

阳性对照

0.8/1.6ml

3

10倍浓缩洗涤液

50/100ml

9

血清稀释板

1/2

4

显色液

11/22ml

10

封板膜

2/4

5

样本稀释液

50/100ml

11

说明书

1

6

终止液

6/11ml




需自备的设备及试剂

微量移液器: 0.5?l-10?l10?l-100?l100?l-1000?l

一次性移液器吸头。

量筒:500ml

96孔板酶标仪。

蒸馏水或去离子水。

洗瓶或洗板机。

样品制备

取动物全血,按常规方法制备血清,要求血清清亮,无溶血。

洗涤液的准备

浓缩洗涤液使用前应恢复至室温,如有盐结晶,摇动使结晶的盐溶解,然后用蒸馏水或去离子水作10倍稀释。稀释好的洗涤液可在4℃存放一周左右。

样品的稀释

在血清稀释板中按1100的体积比稀释待检血清。

注意:阴性和阳性对照不用稀释。取每个样品后都要更换吸头,准确记录每个样品在板上的位置。每个样品在加入到包被板微孔前应充分混匀。

注意事项

试剂盒使用前各试剂应平衡至室温,应将试剂盒各组份放置室温至少1小时以上。使用前应摇匀,使用后放回2-8℃

不同品种、不同批号试剂盒的试剂组分不得混用,使用试剂时应防止试剂污染。

底物和终止液对皮肤和眼可能有刺激性,使用时应该注意防护。

TMB(显色液)不要暴露于强光和避免接触氧化剂。

检测板拆封后应避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥剂放于自封袋中,并尽快置于2-8℃)

所有废弃物在丢弃之前应合理处理以免污染。

严格遵守操作说明可以获得最好的结果。操作过程中移液、定时和洗涤等的全部过程必须精确。

血清稀释板为一次性用品,不得重复使用;血清稀释板的最大容量为300μl/孔。

操作步骤

取预包被的检测板(根据样品多少,可拆开分次使用),将稀释好的待检血清取100μl加入到检测板孔中。同时设阴性对照2孔,阳性对照1孔,取阴性及阳性对照各100μl分别加入反应孔中轻轻振匀孔中样品(勿溢出)。

盖上封板膜(可按实际需要自行裁剪),置37℃温育30分钟。

小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,使用工作浓度洗涤液每孔加250ul,后甩去孔内液体,以上步骤重复4-6次,最后在干净吸水纸上拍干。

每孔加酶结合物50μl,盖上封板膜,置37℃温育30分钟。

小心揭开封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗涤4-6, 方法同3。切记最后在干净吸水纸上拍干。

每孔加显色液100?l,轻微震荡混匀、盖上封板膜37℃闭光显色10分钟。

每孔加终止液50μl,使反应终止,10分钟内测定结果。

结果判定

用酶标仪于450nm630nm作参比波长)读取吸光度OD值。

试验成立的条件是:

阴性对照(NOD<0.20,同时阳性对照(POD值〉0.4

计算方法:

样品OD÷阳性对照OD均值=S/P

阴阳性判断:

S/P≥0.4判断为阳性;

S/P<0.4判断为阴性。

贮存方法 2 - 8?C下贮存。

有效期 12个月。

 


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